載體構(gòu)建克隆

　　載體構(gòu)建克隆（vectorconstruction）是分子生物學研究常用的手段之一。依賴于限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和其它修飾酶的作用，分別對目的基因和載體DNA進行適當切割和修飾后，將二者連接在一起，再導入宿主細胞，實現(xiàn)目的基因在宿主細胞內(nèi)的正確表達。載體構(gòu)建主要包括已有載體多克隆位點MCS的改造和已有載體啟動子、增強子、篩選標記等功能元件的改造。載體構(gòu)建完成后可利用PCR原理進行測序驗證。

　　載體構(gòu)建克隆實驗步驟：

　　1）引物設(shè)計，PCR擴增目的片段

　　2）酶切目的片段與載體

　　3）連接或重組

　　4）載體構(gòu)建轉(zhuǎn)化

　　5）涂板

　　6）挑取克隆酶切或PCR鑒定

　　7）載體構(gòu)建測序驗證

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