尼氏染色

      尼氏染色（Nissl Staining）是用堿性染料染神經(jīng)組織的一種方法。尼氏體是胞質(zhì)內(nèi)的一種嗜堿性物質(zhì)，廣泛見于各種神經(jīng)元，不同神經(jīng)元中的尼氏體形狀、大小和數(shù)量則各有差異。用于尼氏染色的堿性染料主要有焦油紫、亞甲藍、甲苯胺藍和硫堇等。我室主要用焦油紫和硫堇染色。尼氏染色法可以染出尼氏體，用來觀察神經(jīng)元內(nèi)的細胞結(jié)構(gòu)；還可以通過尼氏染色后對尼氏體的觀察來了解神經(jīng)元的損傷情況。

尼氏染色原理：神經(jīng)元細胞體包括一個具有皺褶核膜的大細胞核、稀疏的染色質(zhì)和一個明顯的核仁。在細胞體中細胞質(zhì)是尼氏顆粒，即能夠代表粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點狀嗜堿性表現(xiàn)的嗜堿性顆粒。尼氏顆粒可以用很多染色來顯示如中性紅、亞甲基藍、甲苯胺藍和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時間使一些染色既可以僅突出尼氏物質(zhì)，也可以顯示神經(jīng)元的細胞核和神經(jīng)膠質(zhì)。各種神經(jīng)細胞內(nèi)都含有尼氏體，但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中，但不在于軸突和包體的軸丘。尼氏體會因為生理狀態(tài)的變化而變化，尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)合成蛋白質(zhì)合成的重要部位，當神經(jīng)元受到刺激后，包體內(nèi)的尼氏體會明顯減少。通常尼氏能被堿性染料如硫堇、亞甲藍、甲苯胺藍和焦油紫等染料染成紫藍色。常用的堿性染料有Cresyl violet (焦油紫，甲酚紫，克紫）；thionine (硫荲)；tolridine blue (甲苯胺藍)等

尼氏染色步驟：

1.常規(guī)脫蠟至水（二甲苯I、二甲苯II各15min，然后梯度酒精脫水：100%I、100%II、95%、90%、80%、70%、50%各5min）

2.蒸餾水沖洗3次，每次5min

3.然后置于60℃溫箱用1%甲苯胺藍染色40 min(或用焦油紫染色30s)

4.蒸餾水洗凈染料后，于分別置于70%，80%和95%以及100%乙醇中脫水，再用二甲苯透明

5.后用中性樹膠封片。

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